酶联免疫吸附实验基本原理

971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)。酶联免疫吸附（ELISA）用于：（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位；（2）研究抗酶抗体的合成；（3）显现微量的免疫沉淀反应；（4）定量检测体液中抗原或抗体成份。优点：快速、灵敏、定性、定量、定位实验原理1.包被：抗原/抗体，固相化2.反应： 1)待测抗体/抗原； 2)酶标抗原/抗体3.洗涤：使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离4.底物显色：定性/定量分析常用的酶与底物：酶 底物 显色 测定波长辣根过氧化物酶 邻苯二胺（OPD） 橘红色 492nm辣根过氧化物酶 四甲基联苯胺（TMB） 黄色 450nm碱性磷酸酶 4-硝基酚磷酸盐(p-NPP) 黄色 405nm终止液：2mol/L  H2SO4