常规细胞块失效的替代办法探讨

有研究评估了将细胞转移技术用于细针抽吸物免疫细胞化学的有效性。

使用免疫细胞化学作为细针抽吸（FNA）标本检查的重要辅助技术，在诊断性细胞病理学的日常实践中已经根深蒂固。虽然细胞阻滞制剂最常用于这些研究，但如果细胞块是低细胞或无细胞的，则不能进行免疫细胞化学。作为替代方法，可以对细胞转移的直接涂片进行免疫细胞化学，并且可以使用细胞转移技术（CTT）将多种免疫染色应用于单次直接涂片。国外的一项研究评估了 CTT 对从 FNA 标本制备的直接涂片进行免疫细胞化学研究的有效性。

研究认为，当常规细胞块缺乏足够的细胞性时，CTT 是用于 FNA 标本的检查和诊断的非常有用的工具。尽管在本研究中 CTT 仅用于 FNA 病例的 1.4％，但在使用该病例的 79％ 中，它有助于最终诊断。对于这些患者，CTT 减少了对重复 FNA 的需求，从而降低了潜在的患者发病率和医疗保健成本。Cancer（CancerCytopathol） 2014; 122：898-902。© 2014 美国癌症协会。

方法

选择一种代表性的乙醇固定的 Papanicolaou 染色的直接涂片，其含有来自每种情况的足够的肿瘤细胞，CTT 如下进行：

首先，使用组织学级二甲苯浸泡 FNA 涂片的盖玻片，将一层薄薄的 Mount-Quick 介质（Daido Sangyo Co Ltd，日本）均匀涂抹在细胞材料的顶部，然后将载玻片置于 60℃ 加热的烘箱中 3 小时以硬化 Mount-Quick 培养基。

在载玻片完全干燥后，在干燥的培养基表面上使用标记物以将载玻片分成多个感兴趣的区域，其将进行免疫细胞化学染色。然后将载玻片置于 Coplin 的去离子水罐中并浸没在 45℃±3℃ 的温水浴中 2 小时以软化 Mount-Quick 培养基。

从水浴中取出载玻片后，使用单个手术刀刀片沿着标记区域切割介质，手术刀用于追踪感兴趣细胞的轮廓并排除正常上皮细胞的区域。然后使用手术刀刀片将具有嵌入细胞的安装介质的每个切割部分从载玻片上缓慢剥离，以在切割表面下工作，然后使用镊子轻轻提起软化的柔韧介质。

使用几滴加热的去离子水帮助将切片放置在适当位置，然后将切割的切片布置在新的带正电荷的载玻片上。使用纱布垫对每个部分施加温和的向下压力，纱布垫被抬起，从而除去多余的水，同时切割部分牢固地保留在带正电的载玻片上。

将载玻片在温热的烘箱（60℃）中干燥至少 2 小时或直至载玻片完全干燥。将干燥的载玻片浸没并在 4 次更换二甲苯（每次 15 分钟）中清除以除去封固介质。然后将载玻片用 2 次无水乙醇，2 次 95％ 乙醇变化和 2 次去离子水（每次 15 分钟）再水合。然后进行免疫细胞化学，和去离子水的 2 次变化（每次 15 分钟），然后进行免疫细胞化学，和去离子水的 2 次变化（每次 15 分钟）。然后进行免疫细胞化学。

结果

在本研究所涵盖的 3 年期间，在研究机构进行的 11,259 个 FNA 中有 152 个（1.4％）使用了 CTT。在 152 个 FNA 病例中的 150 个中使用 CTT 成功地进行了 431 个免疫细胞化学染色，包括 46 种不同的抗体。只有 2 例（1.3％）CTT 未能达到理想的效果。每个病例进行的免疫染色的数量从 1 到 8 个免疫染色变化，对于每个 FNA 病例进行平均 3 个免疫染色。

进行免疫细胞化学染色之前和之后的诊断比较，并评估免疫细胞化学结果对最终诊断的贡献。在 150 例 CTT 病例中的 118 例（79％）中，免疫细胞化学的结果对最终诊断有显著贡献，但在 32 例（21％）中没有提供任何附加值。

对最终诊断的贡献可分为 5 个方面：确认 46 例诊断的细胞形态学印象；确定 24 例肿瘤起源；对非小细胞肺癌（NSCLC）进行分型 20 例；提供雌激素受体，孕激素受体和人表皮生长受体 2 治疗转移性乳腺癌 11 例；并在 17 例中完善诊断（表1）。

表1. 细胞转移的免疫细胞化学有助于最终诊断的病例

● 缩写：ER：雌激素受体；HER2：人表皮生长受体2；PR：孕酮受体。

讨论

由 FNA 标本制备的低细胞或无细胞细胞块，限制了病理医生通过支持免疫细胞化学确认或改进其细胞形态学诊断的能力。Sherman 等人的早期研究证明了 CTT 对一小组积液和 FNA 标本的效果。Gong 等人对 CTT 的验证在大约 97％ 的病例中获得了足够的结果。Elsheikh 和 Corbin 还使用来自新鲜肿瘤的触摸印记验证了该技术，并证明了用抗原修复处理的细胞转移片与相应的福尔马林固定组织之间的 100％ 一致率。Wu 等人在研究机构中使用细胞转移的细胞学涂片和相应的石蜡包埋的福尔马林固定组织进行了类似的相关性，其显示出 97.5％ 的一致率。在研究机构采用 CTT 已被证明是成功获得免疫细胞化学的有效替代方法，有助于在使用它的大约 79％ 的 FNA 病例中进行最终诊断。

CTT 最重要的贡献是确认肿瘤的细胞形态学印象，其中 > 50％（46 例中的 24  例）需要通过直接涂片上的 CTT 进行嗜铬粒蛋白和突触素染色，以确认神经内分泌肿瘤的诊断。NSCLC 病例的分型对于现代个性化癌症治疗非常重要。CTT 的使用允许使用免疫细胞化学组进一步亚型分析 NSCLC 病例，包括甲状腺转录因子-1（TTF-1），Napsin A，细胞角蛋白 5/6（CK5 / 6）和 p63 直接涂片的 FNA 标本。在目前的研究中，使用 CTT 将 20 例低分化 NSCLC 进一步分类为腺癌或鳞状细胞癌。

CTT 还允许在细胞块失效的情况下鉴定肿瘤的起源。在 20 例中，我们能够通过进行位点特异性免疫细胞化学鉴定肿瘤来源。最令人印象深刻的例子涉及 2 例甲状旁腺腺瘤，通过 CTT 对直接 FNA 涂片进行 TTF-1 和甲状旁腺激素免疫细胞化学证实，并且通过该技术可以区分 FNA 上的甲状腺滤泡性肿瘤（图2）。

它还被证明是一种可靠的方法，用于评估原发性和转移性乳腺癌患者的雌激素受体，孕激素受体和人表皮生长受体 2 状态（图2）。我们在研究期间成功地将这一模式应用于 11 个案例，最后发现在所研究的 CTT 病例中，有 14% 出现了 FNA 诊断的改进。一组全细胞角蛋白，S-100 和白细胞共同抗原（CD45RB）经常在低分化恶性肿瘤的病例中进行，并且该结果有助于区分癌，黑素瘤，淋巴瘤和肉瘤病例中的肿瘤。

图1

（a）乙醇固定的直接涂片和（b）由甲状腺区域的细针抽吸样品制备的空气干燥的甲醇固定直接涂片显示中度细胞样品，其中有一组出现温和的细胞并且没有显著的细胞核异型性。为了区分甲状腺滤泡细胞与甲状旁腺细胞，使用细胞转移技术进行免疫细胞化学。（c）甲状旁腺激素免疫细胞化学显示强阳性染色，而（d）甲状腺转录因子-1（TTF-1）免疫细胞化学在感兴趣的细胞中发现阴性。

图2

（a）空气干燥的甲醇固定直接涂片，由右乳房浸润性导管癌患者的右腋窝淋巴结细针穿刺制备，显示出明显的细胞样本，被认为是诊断性的转移癌 尽管细胞块是低细胞的，但使用细胞转移技术在相应的乙醇固定的直接涂片上进行使用（b）雌激素受体和（c）孕酮受体的预后免疫细胞化学。

使用 CTT 有几个好处。它技术上简单，可以很容易地由细胞学技师或组织学家教授和执行。执行该技术不需要特殊设备，成本相对较低。此外，即使只有少数诊断性涂片可用于特定病例，也可以从单个细胞涂片中进行多次免疫染色（图3）。使用 CTT 的一个重要限制是仅可使用乙醇固定的直接涂片，因为先前已经显示空气干燥的甲醇固定的载玻片具有约 30％ 的假阴性率并且还经常显示非特异性背景染色。CTT 的另一个缺点是程序是手动的，需要 5 到 7 个小时才能完成，这通常会导致病例周转时间延长一天。

图3

将该单一乙醇固定的直接涂片上的诊断材料分开，并进行 8 种不同的免疫染色。

总结

总体而言，CTT 的益处转化为对重复 FNA 或核心针活组织检查的需求减少以及相关的潜在患者发病率降低以及降低的医疗保健成本。根据我们使用 CTT 进行免疫细胞化学 3 年期间的经验，11,259 例 FNA 病例中的 118 例（1％）显示了有助于最终诊断的有用信息。

参考文献：

1. Sherman ME, Jimenez-Joseph D, Gangi MD, Rojas-Corona RR. Immunostaining of small cytologic specimens. Facilitation with cell transfer. Acta Cytol. 1994;38:18-22.

2. Gong Y, Joseph T, Sneige N. Validation of commonly used immunostains on cell-transferred cytologic specimens. Cancer. 2005;105:158-164.

3. Elsheikh TM, Corbin K. Validation of commonly used immunostains on cell-transferred ytologic specimens. Cancer. 2006;108:135-136; author reply 136.

4. Wu HH, Jones KJ, Cramer HM. Immunocytochemistry performed on the cell-transferred direct smears of the fine-needle aspirates: a comparison study with the corresponding formalin-fixed paraffinembedded tissue. Am J Clin Pathol. 2013;139:754-758.

5. Ferguson J, Chamberlain P, Cramer HM, Wu HH. ER, PR, and Her2 immunocytochemistry on cell-transferred cytologic smears of primary and metastatic breast carcinomas: a  omparison study with formalin-fixed cell blocks and surgical biopsies. Diagn Cytopathol.  2013;41:575-581.

了解更多衡道病理资讯，欢迎访问官网：https://www.histomed.com