三羟甲基氨基甲烷Tris缓冲液的PH范围及优缺点

缓冲溶液是一类能够抵制外界少量强酸和强碱的影响,维持体系pH值基本不变的溶液,其在生物化学的研究工作中有着极为重要的意义。羟甲基氨基甲烷是在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂。我们先从它的PH值说起。

三羟甲基氨基甲烷Tris白色粉末状

Tris缓冲液pH范围

Tris缓冲液在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂,它的常用有效pH范围是在“中性”范围,如:

Tris-HCl缓冲液:pH=7.5~8.5

Tris-磷酸盐缓冲液:pH=5.0~9.0

除TRIS - hcl外,TRIS还有多种衍生化缓冲:

TBS=Tris-HCl+NaCl+KCl常用来清洗免疫染色组织或Western blotting中的Western blotting膜;

TBST=Tris-HCl+NaCl+tween20,一种常用于Western Blotting的膜缓冲液;

TE=Tris-HCl+EDTA,对DNA碱基具有保护作用,常用于DNA的稳定和储存;

TAE=Tris碱+乙酸+EDTA,是一种广泛应用于短片段DNA电泳的缓冲体系;

TBE=三碱基+硼酸+EDTA,适用于长期DNA电泳,对小片段有较好的分离效果。

Tris缓冲液的优点

① 因为Tris碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;

② 对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。

Tris缓冲液的缺点

① 缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.1;

② 温度效应大,温度变化对缓冲液pH值的影响很大,△pKa/℃=-0.031,例如:4℃时缓冲液的pH=8.4,则37℃时的pH=7.4,所以一定要在使用温度下进行配制,室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃~4℃;

③ 易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封;

④ 此缓冲液对某些pH电极发生一定干扰作用,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。

由此可以看出在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱,其溶液pH值变化不大,但若加入酸,碱的量多时,缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。这说明它的缓冲能力是有一定限度的。缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。

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