条件性基因敲除小鼠的繁育策略

要获得条件性基因敲除小鼠至少需要两步遗传杂交。第一步，将GeneX-Cre杂合子小鼠与GeneY-flox杂合或纯合子小鼠交配，获得的Cre与flox双阳性（GeneX Cre/wt; GeneY lox/wt）子代小鼠。第二步，将Cre与flox双阳性（GeneX Cre/wt;GeneY lox/wt）子代小鼠再与GeneY-flox杂合或纯合子小鼠交配，获得所需的GeneX Cre/wt; GeneY lox/lox小鼠为实验组。一般对照组为同窝GeneX wt/wt; GeneY lox/lox小鼠。如果Cre的整合破坏内源基因，那么应选择GeneX Cre/wt;GeneY wt/wt小鼠作为对照。

条件性基因敲除的常规育种策略。

在进行基因型鉴定的时候，不仅要对小鼠鼠尾进行基因鉴定，对特异性目标组织也需要进行基因型检测。这时需要设计PCR引物方便区分野生型等位基因、flox等位基因和重组后的KO等位基因。在鼠尾鉴定时，如果发现重组后的KO产物，那么需要考虑该组织特异性Cre小鼠的生殖系表达问题。

条件性基因敲除的基因型鉴定引物设计示意图。

之后需要检测重组后靶基因的mRNA和蛋白表达，来验证Cre-lox系统的工作效果。根据靶基因与lox位点的位置，可以设计qPCR模板或者探针来检测重组后的靶基因转录情况。进一步可以通过免疫组化检测条件性基因敲除后靶基因蛋白翻译是否缺失或异常。不过这很大程度上依赖于探针或抗体的灵敏度和特异性。