细胞活力鉴定方法有哪些？

细胞活力=活细胞数/细胞总数×，常用台盼蓝法、MTT法或者CFSE法进行细胞活力检测。

台盼蓝法

原理：活细胞不被染色，死细胞被染成蓝色。

方法：500ul细胞悬液加入500ul 0.4%台盼蓝染液，染色2-3分钟；将少许悬液涂于载玻片上，加上盖片，显微镜下取几个视野分别统计死细胞和活细胞数，计算细胞活力。

MTT法

原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可使外源性MTT分解产生水不溶性蓝色结晶状甲瓒颗粒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。DMSO溶解甲瓒后，用酶联**检测仪在540nm或720nm波长处测定其吸收值，可间接反映活细胞数量。可用于生物活性因子的活性检测、大规模的**筛选、细胞毒性试验鉴定等。

方法：将细胞悬浮液以1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul，培养细胞3-5d（依据实验目的和要求决定培养时间）后，每孔加入MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4）20ul，37℃温箱中孵育4h后，小心去上清，加入150ul DMSO溶解后，用酶标仪进行检测。（市场上售卖的CCK8试剂盒，便是对MTT法的一种优化）。

CFSE法

原理：CFSE进入活细胞后，可与胞内蛋白共价结合，水解后释放出绿色荧光。CFSE随着细胞分裂而平均分配至子代细胞中，而导致荧光强度逐级递减，依据这一特性，可被用于检测细胞增殖活力。

方法：制备细胞悬液后，加入等体积的CFSE工作液（2.5-5uM），于37℃孵育10 min，用10倍体积的预冷的基础培养基（不加血清）立即终止标记10min。用PBS离心洗涤两次后，用适量的培养液重悬细胞。培养一段时间后，离心收细胞，用PBS洗两次并重悬后，上流式仪器检测荧光强度的稀释比例。