小鼠脑缺血再灌注模型实验方法

急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）是临床上较为常见的急危重病症之一，常见于大手术后、创（烧）伤、危重病等患者中，可导致患者电解质紊乱、酸中毒及容量负荷过重，并最终可发展成为尿毒症。

肾缺血再灌注（renal ischemiareperfusion，RIR）损伤是由各种原因导致的肾脏灌注不足所致，伴随着一系列连贯的细胞事件发生，包括活性氧(ROS)释放、凋亡、坏死、炎症细胞的浸润和活性介质的释放，从而导致组织损伤，常见于各种类型的休克、急性肾动脉阻断或肾脏移植等临床治疗过程，是临床上导致AKI的最常见原因。应用微型动脉夹夹闭双侧肾蒂方法制备小鼠IRI模型，是目前较为常用的研究方法。

模型制备方法：

动物麻醉后（可选择气体麻醉或腹腔麻醉），沿腹正中线做1.5~2.0 cm的切口，逐层分离皮肤、腹膜，进入腹腔，将肠道推向一侧，找到肾蒂后用无损伤微型动脉夹迅速阻断左右肾蒂，可见肾脏由鲜红变紫黑色，表示夹闭成功。

根据实验具体需要确定夹闭时间，雄性小鼠一般选择30~45min，雌性小鼠缺血75min左右。去除动脉夹，恢复血流灌注，可见肾脏迅速由紫黑色变为鲜红色，恢复原来颜色，术毕分层缝合关闭腹腔。

术后小鼠于24~29 ℃的环境保暖，补充水与饲料。术中应用生理盐水使小鼠保持充分的水化。

检测指标：

血生化检测

肌酐(creatinine，Cre)：是肌肉在机体内代谢的产物，主要由肾小球滤过排出体外。肾损伤后血肌酐水平升高。

尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN），肾功能主要指标之一，尿素氮从肾脏肾小球过滤后排泄到尿中，如果肾脏的排泄机能变差，血液中尿素氮的浓度会增加。

病理学检测

肾组织HE染色，观察肾小管坏死情况；

TUNEL染色观察细胞凋亡情况；

根据实验目的，通过免疫组化及荧光方法检测相关蛋白；

蛋白及分子生物学检测：

PCR、Western Blot检测相关基因及蛋白表达情况。