基因敲除细胞株(系)构建，用质粒？慢病毒？还是RNP法 / 开普饭

来自病毒载体的CRISPR-Cas9核酸酶和gRNA的长时表达可能导致脱靶和免疫原性.因此,治疗的基因组编辑应用需要瞬时递送系统.来自日本京都大学的Akitsu Hotta研究组通过利用两种不同的归 ...

基于CRISPR的基因组编辑效应子的瞬时递送对于减少脱靶效应和免疫反应非常重要.最近,已有研究报道了Cas9核糖核蛋白(RNP)递送的细胞外囊泡(EVs).但是,缺乏将RNP富集到EV中的机制限制了E ...

迄今为止,CRISPR-Cas9基因编辑技术的应用因递送方式而受到限制.Cas9蛋白是一个非常大的分子(~160 kDa),且gRNA的长磷酸骨干带高度负电荷,这些特征阻碍了其通过细胞膜进入细胞. 人 ...

CRISPR/Cas9技术可以让目的基因产生功能性缺失突变,并由此改变了科学家研究目的基因的方式.利用CRISPR/Cas9技术在单个细胞上产生一个突变来建立一个新的细胞系,也就是CRISPR介导的基 ...

Puro 抗性浓度摸索实验将细胞如下图1稀释.给药7天后,弃培养液,用台盼蓝染色2 min,显微镜下观察细胞存活情况.确定细胞多克隆细胞筛选和单克隆细胞筛选浓度. 图1 抗性浓度摸索单克隆形成验证 ...

对于许多严重的疾病,例如心力衰竭.晚期糖尿病.血友病.骨髓瘤.末期肝硬化等,目前还未能研发出完全治愈这些疾病的药物,最有效的方法是异体移植.但是由于供体有限以及自体免疫排斥反应的风险,科学家们苦心专研 ...

如果选择的方法不对,或者细胞株不对,不同的细胞株做基因敲除细胞系的改造会有什么变化呢?筛选细胞是基因敲除细胞成败的重要环节!如果没有正确的方法那么基因敲除的细胞株工作就不能顺利的进行,首先要知道影响基 ...

今天我们要讲的主角是Alport综合症致病基因之一COL4A5. 基因基本信息 COL4A5基因研究概况 COL4A5是编码IV型胶原蛋白的六个基因之一,这种蛋白胶原肽是细胞膜的重要基质之一.该基因位 ...

基因敲入细胞系技术背景基因敲入(KI)是指将外源性基因通过同源末端重组的方式插入到基因组中,使其在细胞内稳定表达的一种基因编辑技术.KI的外源基因可以是具有蛋白表达功能的编码基因,可以是参与基因调控 ...

基因敲除细胞系在我们研究基因功能的时候,基因敲除(Knock out,KO)是实现基因loss of function的重要调控方式.相比于传统的基因干扰(RNAi)技术,基因敲除可完全消除目的基因 ...

表达就是把基因上调表达,即该基因被过度的转录.翻译,最终基因表达产物超过正常水平.做过表达要比做干扰难度高一些,过表达需要表达出长链的mRNA,这一点比较困难,而干扰只需表达出短片段的shRNA即可. ...

Fgf21基因敲除小鼠背景信息 FGF家族成员具有广泛的促有丝分裂和细胞存活特性,并参与多种生物过程,包括胚胎发育.细胞生长.形态发生.组织修复.肿瘤生长和侵袭. 成纤维细胞生长因子21(FGF21) ...

基因敲除细胞株(系)构建，用质粒？慢病毒？还是RNP法