质粒瞬转构建稳定细胞系？ / 开普饭

Puro 抗性浓度摸索实验将细胞如下图1稀释.给药7天后,弃培养液,用台盼蓝染色2 min,显微镜下观察细胞存活情况.确定细胞多克隆细胞筛选和单克隆细胞筛选浓度. 图1 抗性浓度摸索单克隆形成验证 ...

研究某个基因的功能最常用的手段是在宿主细胞中过量表达或者通过RNA干扰的方法knock-down该基因,常规手段有瞬时转染和筛选稳定细胞系. 筛选出该基因的过表达或者RNA干扰的稳定细胞系会给您的实验 ...

如果选择的方法不对,或者细胞株不对,不同的细胞株做基因敲除细胞系的改造会有什么变化呢?筛选细胞是基因敲除细胞成败的重要环节!如果没有正确的方法那么基因敲除的细胞株工作就不能顺利的进行,首先要知道影响基 ...

一些实验前的说明 sgRNA验证:在实验开始前,可以通过sgRNA在线验证,筛选高效率的sgRNA用于敲除细胞系的构建. 基因拷贝数:建议在开始实验之前确定目标基因的拷贝数.许多永生化细胞系,尤其是癌 ...

一.CRISPR/Cas9系统的工作原理 CRISPR系统是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御机制,其中以二类CRISPR系统即CRISPR/Cas9最为经典常用.此系统的工作原理是 ...

原理分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体.外源基因进入细胞后,部分能够通过细胞质进入细胞核内,根据细胞类型,至多80%的进入核内的外源DNA得到瞬时表达.极少数情况下,进入细胞的外 ...

主要有三类方法: 1)单克隆环法:此类方法多用于整合率低的转染方法或者需要得到单克隆细胞株的实验.其优点在于工作量小,只需将转染或者病毒载体感染后的细胞按照一定的细胞密度转移至新皿中,并使用合适的药物 ...

随着实验室细胞培养的发展,除了原代培养之外,人工开发出来的细胞系的保存越来越重要.冷冻保存细胞系的优点如下:1.减少基因漂移:2.减缓细胞系的衰老:3.稳定表型:4.减少微生物污染及交叉污染机会等.细 ...

多克隆细胞系是基因转染后直接用抗药筛选得到的.筛选出的细胞都表达抗性基因和目的基因.但是包含了各种不同的细胞克隆.不同克隆的目的基因整合位置和表达量均有所不同.如果转染的基因包含了荧光标签,多克隆细胞 ...

稳定细胞株构建包含哪些关键步骤? A:如下 ♀ 一般稳定细胞株的构建包含以下几个部分: 表达之类构建细胞转染 pool细胞筛选单克隆筛选细胞库建立表达质粒构建 A:如下 ♀ 将带有内切酶位点的 ...

化学试剂介导的转染方法和电转,整合率低,同时整合位点不稳定,易发生再次丢失的情况,而且整合位点一般都在转录活跃区之外,所以并不是理想的稳定整合工具.另外,整合后的拷贝数是由核内的外源DNA局部浓度,而 ...

随着科技发展,很多曾经非常专业的安防设备开始进入了普通人的生活,比如一套稳定的视频监控系统,就是家庭安防的重要媒介.因为国产品牌近些年在视频监控领域的技术实力很强,所以也带来了不少容易上手,同时运行稳 ...

"我没有灵感啊,总是写不出来,怎么办啊?",这是很多人问我最多的问题.在大多数人的认知里,写作是一件需要灵感的事情,包括曾经的我,在没有日更2000字之前,我也没有怀疑这个观点真理 ...

今天记录一点构建稳定盈利模式的一些思考. 追求快速盈利的方法,很简单,就是做市场的最强的票,三板.四板以上的,挑选最强的: 这种方法可能在现在这种非常热的氛围效果不错,一旦市场冷却,出现调整,就是大面 ...

随着网络设备行业竞争日趋激烈,业内品牌商为提升市场竞争力,选择将生产制造环节外包,将自身发展重心集中在响应市场需求.调整产品结构及经营品牌上,以此争取更大发展权.作为我国知名网络设备制造企业,深圳市菲 ...

人源肿瘤细胞系异种移植(CDX),即将体外传代培养的肿瘤细胞接种至免疫缺陷小鼠,是研究肿瘤细胞增殖以及体内筛选药物最常用的模型之一.由于细胞体外长期传代而呈现有高同源性特点,模型建立容易.重复性好,但 ...

质粒瞬转构建稳定细胞系？