m6A-meRIP-seq结果解读（三）

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如何进行数据筛选及数据挖掘呢？

Tip:对于首次拿到分析结果的老师来说，第一步是阅读结题报告以了解整体项目的分析流程、分析内容解释说明及所在的文件夹位置，以对整个项目有一个初步了解，随后查看完整分析结果并进行数据分析及筛选等。在项目结题报告中已提及的相关说明，在此不再详细描述，本文旨在结题报告的基础上进行补充说明，希望对后续的数据挖掘有所帮助。主要从以下几个层面进行阐述：

①建库测序

采用免疫共沉淀方法，即甲基化RNA特异性抗体与被随机打断的RNA片段进行孵育，抓取有甲基化修饰的片段进行测序；同时需要平行测序一个对照(control)样本，对照样本用于消除抓取带有甲基化片段过程中的背景。提取总RNA后，加入片段化试剂，将完整的mRNA进行片段化。随即将其分为两份，一份加入带有预混好的m6A抗体免疫磁珠，对含有m6A甲基化的mRNA片段进行富集；另一份作为对照，直接构建转录组测序文库（即PolyA抓取+dUTP建库）。采用链特异性建库流程构建测序文库，分别将构建好的2个测序文库进行高通量测序。因此同一个样本会获得2部分测序数据，用于后续的数据分析。