蛋白质纯化技术应用原理

蛋白质纯化研究发展至今已有200多年历史。科学家从简单的沉淀程序开始，在历经各种努力，技术不断改进下，更替了多种方式进行蛋白质纯化的研究，相关技术在各领域的应用也日趋成熟。目前在生物化学领域中，主要以盐析法，胶体过滤法，离子交换法，亲和色谱法方式来进行蛋白质纯化，以下简单介绍这几种方式及其特色。

蛋白质纯化技术应用原理

盐析法：透过蛋白质加入高盐缓冲液，降低蛋白质溶解度，将所需物质从中分离提取。

胶体过滤法：利用分子通过吸收性材料筛选掉大分子，从而将所需物质从中分离提取。

离子交换法：根据离子和极性分子对离子交换剂的亲和力将所需物质从中分离提取。

亲和色谱法：利用对所要提取之分子有高度亲和性的物质将其吸附并排除杂质后从中分离提取

蛋白质纯化技术应用范围

盐析法：生物分离工程

胶体过滤法：监测主要性质包含预期和分子量

离子交换法：分析核酸，胺基酸

亲和色谱法：酶与底物，受体与配体或抗体与抗原之间的相互作用

建议使用的缓冲剂

盐析法：TES、tris-hcl

胶体过滤法：TES、tris、 tris-hcl、 BIS-TRIS

离子交换法：tris、 tris-hcl、 BIS-TRIS

亲和色谱法：TES、mops、 pipes、tris-hcl

蛋白质纯化研究过程中应该注意什么？

在蛋白质纯化研究过程中首重温度控制，pH值与缓冲剂的选择等参数。要进行蛋白质纯化，必须先将细胞分裂，但细胞分裂后，会致使蛋白质样本变得脆弱，此时若将样本因此应在适宜的温度环境中处理样本，以免影响实验结果。