点突变小鼠技术实验流程 / 开普饭

科研讲坛期刊,实验,科研心得-- 每天聊点与科研有关的事儿大家好,我是喜欢每天挖点实用技术的无花果~ 不知道大家有没有发现,最近几年有一项技术非常火爆,相信科研圈的小伙伴们都不陌生,那就是CRSP ...

条件性点突变主要通过染色体位点特异性重组酶系统实现,如Cre-loxP.Flp-FRT.Dre-Rox系统等,其中最常用的是Cre-loxP系统.在待突变目的基因序列两端各插入两种loxP位点,得到F ...

条件性基因敲除主要通过染色体位点特异性重组酶系统实现,如Cre-loxP.Flp-FRT.Dre-Rox等,其中最常用的是Cre-loxP系统.在待敲除目的基因序列两端各插入一个loxP序列,得到Fl ...

根据目的基因序列设计合成sgRNA,与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵.Cas9核酸酶.sgRNA共同结合到基因组靶序列后,切割双链DNA,通过非同源末端连接(Non-homologous en ...

Rosa26基因在大部分组织和细胞中都有持续表达,因此在这个区域定点插入外源基因,可以实现目的基因在各组织和细胞类型中的广泛表达. 定点基因过表达技术优势可获得身体大部分组织和各类型细胞中稳定表达外 ...

条件性过表达主要通过染色体位点特异性重组酶系统实现,如Cre-loxP.Flp-FRT.Dre-Rox系统等,其中最常用的是Cre-loxP系统.构建Rosa26-(SA/pCAG)-loxP-Sto ...

根据目的基因序列设计合成sgRNA,将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞,通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因位点进行切割,引起DNA双链断裂(DSB),通过细胞自身的非同源末端修复(NHEJ ...

根据基因敲入位点序列设计合成sgRNA,将Cas9.sgRNA及Donor质粒共同转染目的细胞,通过sgRNA引导Cas9核酸酶对基因敲入位点进行切割,引起DNA双链断裂(Double-strand ...

RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的.由双链RNA诱发的.同源mRNA高效特异性降解的过程.RNAi大体分为两步,首先起始RNA(dsRNA或miRNA ...

体外培养细胞在发育.组织维持与重塑.肿瘤发生机制.再生医学.新药开发等生命科学各研究领域中发挥了重要作用.原代细胞经过有限代数的增殖后通常会出现衰老死亡,因此生物学家需要不断地用组织重新进行原代培养以 ...

点突变小鼠技术实验流程