石蜡包埋组织的流式细胞样本制备方法

外科手术获得的实体组织，大部分经过石蜡包埋处理。石蜡包埋组织单细胞分散方法的建立，扩大了流式细胞术的应用范围。

　　1，将石蜡包埋组织切成40~50μm厚的组织切片3~5片，或者用乳钵研成0.5mm直径大小的颗粒，放入10ml的试管中;

　　2，加入5~8ml二甲苯，室温下脱蜡1~2天，视石蜡脱净与否，更换1~2次二甲苯，石蜡脱净后，弃去二甲苯;

　　3，水化：依次加入5ml 的100%、95%、70%、50%梯度乙醇，每次10min;

　　4，去乙醇，加入蒸馏水3~5ml，10min后弃之;

　　5，消化：可加入2ml的0.5%胰蛋白酶(pH1.5~2.0)消化液，置于37℃恒温水浴中消化30min，在此期间，每隔10min用振荡器振荡1次;

　　6，消化30min后，加入含血清培养基终止消化;

　　7，经300目尼龙网过滤，未消化好的组织可进行第二次消化;

　　8，收集细胞悬液，300g离心5min，弃上清。