动物用agomir产品案例应用策略解析丨含动物造模、实验处理、给药方式、给药剂量……

MicrON^TM miRNA agomir是经过特殊化学修饰的miRNA激动剂，可直接注射于动物体内，用于模仿内源性miRNA。相比细胞用miRNA mimic，动物用miRNA agomir具有更高的稳定性和miRNA活性，更易通过细胞膜、细胞间隙而富集于靶细胞。在动物实验中agomir通常可以通过系统或局部注射等方法进行给药。关于科研实验中的给药方式一般没有固定的模式，给药方式应该根据具体的实验灵活设计，在实际实验过程中不断调整调整和优化。

本期文章小编给大家带来的是关于动物用miRNA agomir给药方式的客户应用案例，我们也将不定时地更新更多miRNA agomir在动物体内的应用策略，希望能够对正在或即将要做动物实验的各位小伙伴有一定的帮助！

锐博生物miRNA agomir

中文名：miRNA激动剂

功能：模仿内源性的miRNA

纯化方式：in vivo（Standard in vivo）

稳定性：经特殊化学修饰，稳定性高

给药方式：局部给药(1-10 nmol)；系统给药(5-20 nmol)

作用方式：双链RNA，作用链为正义链，通过模拟miRNA进入miRISC复合物来调节靶mRNA的表达而发挥作用

应用案例1：

Journal of Hepatology（IF20.583）丨Multigenerational maternal obesity increases the incidence of HCC in offspring via miR-27a-3p

疾病模型：肥胖、肝细胞癌（怀孕的C57BL/6雌性小鼠尾静脉注射PBS或miR-27a-3p agomir，p15雄性子代断奶后维持NC和高脂饮食(HFD)，并通过腹腔注射二乙基亚硝胺DEN以诱导HCC）

动物模型：高脂饮食诱导的多代肥胖模型（分为4组，分别为Control+NC组、Agomir+NC组、Control+HFD组和Agomir+HFD组。以NC喂养的雄性小鼠作为对照）

给药方式：尾静脉注射

给药剂量：在E12.5时，每只小鼠5μmol；E14.5至E18.5期间，每只小鼠3μmol

给药频率：在E12.5时注射1次，E14.5至E18.5期间每隔一天注射1次

Fig1.母亲注射了miR-27a-3p agomir的后代中，无论饮食如何，肿瘤数量显著增加；且HFD条件下的子代肿瘤负担更重

参考文献：Sun Y, Wang Q, Zhang Y, et al. Multigenerational maternal obesity increases the incidence of HCC in offspring via miR-27a-3p[J]. Journal of Hepatology, 2020, 73(3): 603-615.

应用案例2：

Advanced Science（IF15.844）丨Targeting YAP1/LINC00152/FSCN1 Signaling Axis Prevents the Progression of Colorectal Cancer

疾病模型：结直肠癌（首先，用miR-185-3p agomir、miR-632 agomir和control agomir处理LINC00152稳定过表达或含空载的HCT116细胞24h，然后将2×10⁶个细胞的单细胞悬液接种于小鼠的背侧或注射于小鼠的尾静脉）

动物模型：异种移植裸鼠模型、“尾静脉-肺转移”裸鼠模型（随机分为4组，分别为agomir NC组、LINC00152过表达+agomir NC组、LINC00152过表达+ miR-185-3p agomir组和LINC00152过表达+ miR-632 agomir组）

给药方式：瘤内注射、尾静脉注射

给药剂量：150 µL, 200 × 10⁻⁹ M

给药频率：瘤内注射1次（第15天），尾静脉注射2次（第30天和第45天）

Fig2. 注射miR-185-3p和miR-632 agomirs降低了裸鼠移植瘤的生长和转移瘤的肺致瘤性

参考文献：Ou C, Sun Z, He X, et al. Targeting YAP1/LINC00152/FSCN1 signaling axis prevents the progression of colorectal cancer[J]. Advanced Science, 2020, 7(3): 1901380.

应用案例3：

Molecular Cancer（IF15.302）丨LINC00173.v1 promotes angiogenesis and progression of lung squamous cell carcinoma by sponging miR-511-5p to regulate VEGFA expression

疾病模型：肺鳞状细胞癌（至少6-8只4-6周龄BALB/c-nu小鼠，每组随机分配不同体重的小鼠。移植肿瘤实验，将1-4×10⁶ 个NCI-H1975细胞皮下注射接种于裸鼠腹股沟褶，以构建异种移植裸鼠模型。7天后，NCI-H1975–LINC00173.v1接种小鼠随机分为3组进行后续试验）

动物模型：异种移植裸鼠模型（随机分为3组，分别为贝伐单抗组、agomir-511-5p组和对照组）

给药方式：腹腔注射

给药剂量：10 μmol

给药频率：每周1次，共4周

Fig3. 注射agomir-511-5p可有效抑制LINC00173.v1过表达的NCI-H1975细胞的致瘤能力，甚至达到与贝伐单抗治疗相当的水平

参考文献：Chen J, Liu A, Wang Z, et al. LINC00173. v1 promotes angiogenesis and progression of lung squamous cell carcinoma by sponging miR-511-5p to regulate VEGFA expression[J]. Molecular cancer, 2020, 19: 1-19.

应用案例4：

Nature Communications（IF12.121）丨miR-135a-5p mediates memory and synaptic impairments via the Rock2/Adducin1 signaling pathway in a mouse model of Alzheimer’s disease

疾病模型：阿尔茨海默病（雄性APP/PS1小鼠购买于Jackson实验室，选择8月龄APP/PS1小鼠进行agomir注射，因为9月龄小鼠的记忆障碍明显）

动物模型：8月龄APP/PS1小鼠模型（实验组：注射miR-135a-5p agomir；对照组：注射scramble agomir）

给药方式：海马体注射

给药剂量：/

给药频率：将miR-135a-5p agomir (Ago)或scramble (Scr)注射到8月龄APP/PS1小鼠或野生型同窝幼崽的CA1区域。4周后，对小鼠进行Morris水迷宫实验、电生理记录、western blotting和高尔基染色。

Fig4. 海马体注射miR-135a-5p agomir (Ago)可以挽救AD小鼠的记忆损伤

参考文献：Zheng K, Hu F, Zhou Y, et al. miR-135a-5p mediates memory and synaptic impairments via the Rock2/Adducin1 signaling pathway in a mouse model of Alzheimer’s disease[J]. Nature communications, 2021, 12(1): 1-16.

应用案例5：

Theranostics（IF8.577）丨Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cell therapy ameliorates lupus through increasing CD4+ T cell senescence via MiR-199a-5p/Sirt1/p53 axis

疾病模型：系统性红斑狼疮（雌性MRL/lpr小鼠购买于上海斯莱克实验动物有限责任公司，选择17周龄MRL/lpr小鼠模型进行agomir注射）

动物模型：MRL/lpr狼疮小鼠模型（每组6只，实验组：注射miR-199a-5p agomir；对照组：注射agomir NC）

给药方式：尾静脉注射

给药剂量：20nmol（agomir稀释于0.2ml生理盐水中）

给药频率：每4天一次，连续4周

Fig5. 尾静脉注射MiR-199a-5p agomir可改善MRL/lpr小鼠的疾病表型和免疫紊乱

参考文献：Cheng T, Ding S, Liu S, et al. Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cell therapy ameliorates lupus through increasing CD4+ T cell senescence via MiR-199a-5p/Sirt1/p53 axis[J]. Theranostics, 2021, 11(2): 893.

应用案例6：

JCI Insight（IF6.206）丨Epithelial miR-206 targets CD39/extracellular ATP to upregulate airway IL-25 and TSLP in type 2-high asthma

疾病模型：哮喘（采用HDM敏化和激发的方法建立动物模型。即雌性C57BL/6小鼠在第0、7和14天通过腹腔注射100μL冻干HDM提取物溶液（0.1 mg/mL）和Al(OH)3佐剂，并在第21、22和23天鼻腔给药40μL HDM溶液(3 mg/mL)或生理盐水。第20天和第22天鼻腔给药miR-206 agomir、对照agomir）

动物模型：变应性气道炎症小鼠模型（实验组：miR-206 agomir处理；对照组：control agomir处理）

给药方式：鼻腔给药

给药剂量：5nmol（agomir稀释于40μL生理盐水中）

给药频率：第20天、22天给药

Fig6. 鼻腔给药miR-206 agomir显著抑制了HDM诱导的Cd39表达，并进一步增强了HDM诱导的ATP浓度的增加

参考文献：Zhang K, Feng Y, Liang Y, et al. Epithelial microRNA-206 targets CD39/extracellular ATP to upregulate airway IL-25 and TSLP in type 2-high asthma[J]. JCI insight, 2021.

应用案例7：

Gastroenterology（IF17.373）丨MicroRNAs 15A and 16–1 Activate Signaling Pathways That Mediate Chemotaxis of Immune Regulatory B cells to Colorectal Tumors

疾病模型：结直肠癌（通过氧化偶氮甲烷加右旋糖酐硫酸酯钠[ DSS ]诱导小鼠结直肠癌病变，即7周龄雌性WT或KO小鼠[ MIR15A和MIR16-1缺失 ]腹腔注射10 mg/kg bw的氧化偶氮甲烷，阴性对照注射0.9% NaCl溶液。5天后，在饮用水中以2.5％的最终浓度给药DSS，持续7天，然后是14天的正常饮水。此过程重复3次。）

动物模型：CRC小鼠（实验组：注射MIR15A和MIR16-1 agomir；对照组：注射agomir NC）

给药方式：静脉注射

给药剂量：5 nmol（agomir稀释于0.1ml磷酸盐缓冲盐水中）

给药频率：每4天一次，连续注射15次

Fig7. 注射MIR15A和MIR16-1 agomir的小鼠肿瘤生长更加缓慢

参考文献：Liu R, Lu Z, Gu J, et al. MicroRNAs 15A and 16–1 activate signaling pathways that mediate chemotaxis of immune regulatory B cells to colorectal tumors[J]. Gastroenterology, 2018, 154(3): 637-651. e7.

应用案例8：

Nature Communications（IF12.121）丨CircAnks1a in the spinal cord regulates hypersensitivity in a rodent model of neuropathic pain

疾病模型：采用L5/L6脊神经结扎的方法制备大鼠神经性疼痛模型。在注射戊巴比妥钠（50 mg kg-1，i.p.）后，将聚乙烯10（PE10）导管植入L5/L6椎间蛛网膜下腔中；导管尖端定位在L4–L6脊髓节段水平之间。然后使大鼠恢复5天。表现出后肢麻痹或瘫痪的动物被排除在研究之外。

动物模型：SNL（脊神经结扎）处理大鼠（实验组：注射agomir或antagomir；对照组：注射agomir control或antagomir control）

给药方式：鞘内注射

给药剂量：1nmol/d agomir；1nmol/d antagomir

给药频率：每天一次，连续注射5天

图8. CircAnks1a通过靶向miR-324-3p调控VEGFB的表达

参考文献：Zhang S B, Lin S Y, Liu M, et al. CircAnks1a in the spinal cord regulates hypersensitivity in a rodent model of neuropathic pain[J]. Nature communications, 2019, 10(1): 1-16.