piggyBac诱导表达载体是什么？

Tet-On基因诱导表达载体系统是在哺乳动物细胞中进行实时GOI表达的强大工具。我们的Tet-On基因诱导表达载体系统在无四环素及其类似物（多西环素）的情况下可以做到GOI几近完全沉默并且在加入四环素及其类似物（多西环素）的情况下快速响应实现GOI表达。这是通过tTS和rtTA蛋白响应四环素及其类似物（多西环素）的基因调控功能实现的。当不存在四环素及其类似物（多西环素）的情况下，目的基因几乎或完全沉默；当往体系中添加四环素或其他类似物（多西环素）时，目的基因得到快速高水平表达。四环素不存在的情况下时，衍生于TeR（Tet抑制蛋白）和KRAB-AB（Kid-1蛋白转录抑制结构域）的融合蛋白tTS结合TRE启动子，导致基因转录抑制。另一方面，四环素存在时，衍生于突变型Ter抑制蛋白和VP16蛋白（转录激活结构域）的融合蛋白rtTA结合TRE启动子，激活基因转录。

我们的piggyBac基因诱导表达系统包含两个载体，一个载体被称为辅助质粒，负责编码转座酶；另一个载体被称为转座子质粒，包含两个末端重复序列（TR）以及两者之间的被转座区域。被转座区域中的四环素基因诱导表达盒含有一个可驱动用户选择的GOI表达的四环素响应因子（TRE）启动子，以及驱动调控蛋白tTS/rtTA表达的广泛启动子或者组织特异性启动子。

当辅助质粒和转座子质粒共转染靶细胞时，辅助质粒产生的转座酶将会识别转座子的两个TR元件，然后将被转座区和两个TR元件插入到宿主基因组中。转座插入通常发生在包含TTAA序列的宿主染色体位点，并在转座子两侧出现TTAA重复序列。

PiggyBac属于II类转座子，通过“剪切—粘贴”的机制移动，从一个地方转座到另一个地方，而不留下序列本身（恰好相反，I类转座子是通过“复制—粘贴”的方式移动）。由于辅助质粒是通过瞬时转染进入宿主细胞的，故会逐渐丢失。随着辅助质粒的丢失，转座子在宿主基因组中变成了永久整合。当这些宿主细胞再次被辅助质粒转染，整合的转座子会再次通过“剪切—粘贴”的机制移动。