基因敲除质粒的构建技术及方法 / 开普饭

一.利用Cas9 质粒建立knock-out 细胞系实验的详细过程 1.1 确定待敲除基因的靶位点 1.2 设计识别靶位点的识别的一对DNA Oligo(引物) 1.3 构建表达sgRNA的质粒 1. ...

载体系统借助真核基因表达调控的理论,可将较强的顺式作用元件集中到一个载体中,使其方便高效地表达外源基因.目前,已经构建了许多真核表达载体,它们包含适当的顺式作用元件和选择标记.顺式作用元件主要有启动子 ...

慢病毒可快速.高效的将目的基因整合到宿主细胞基因组,非常适合用于构建稳转细胞株.但慢病毒也有缺点,即使是稳转细胞株,可能会随着传代次数的增加而慢慢丢失干扰或者过表达的效率.其中可能是原因是在多克隆稳转 ...

Fgf21基因敲除小鼠背景信息 FGF家族成员具有广泛的促有丝分裂和细胞存活特性,并参与多种生物过程,包括胚胎发育.细胞生长.形态发生.组织修复.肿瘤生长和侵袭. 成纤维细胞生长因子21(FGF21) ...

传统策略是通过同源重组的方式,用 Neo 基因替换或删除关键外显子来敲除基因,其周期长,费用高.TALEN,CRISPR 技术出现后,加速了基因敲除鼠的制作,而且降低了费用.CRISPR 切割 DNA ...

基因敲入大鼠是利用CRISPR/Cas9基因敲入技术,针对靶基因设计.构建相应的 gRNA质粒和donor vector,通过Cas9核酸酶的切割作用和同源臂的同源重组,引入特定的突变或外源基因.比如 ...

通过ES打靶技术生成Nlrp3 (Cias1)敲除小鼠模型,通过在ATG起始位置处插入EGFP达到敲除的目的: 图5. Nlrp3基因敲除小鼠打靶策略[5] 野生型.Nlrp3+/-和Nlrp3-/- ...

越来越多的研究表明,伴随代谢异常产生的线粒体功能障碍是Ⅱ型糖尿病.肥胖.NAFLD等代谢疾病的共同内在特征.因此,探究线粒体功能障碍对NAFLD的致病机理和潜在分子靶标成为目前研究人员探索的一个新的治 ...

早在1998年研究人员就发现,由于在无菌条件下未观察到IL-10敲除小鼠发生结肠炎,表明IL-10敲除小鼠自发结肠炎需要肠道菌群的存在.此外,研究表明,IL-10敲除小鼠缺乏IL-10导致对细菌抗原的 ...

CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是新出现的一种由sgRNA指导Cas核酸内切酶对靶向基因进行 ...

基因敲除质粒的构建技术及方法