慢病毒构建稳转细胞系实验流程 / 开普饭

编译:思越,编辑:十九.江舜尧. 原创微文,欢迎转发转载. 导读 SARS-CoV-2引起疾病的大流行,但关于SARS-CoV-2感染后的病毒行为和宿主反应的研究很少.作者通过深入分析SARS-CoV ...

慢病毒构建并包装后,以进行贴壁细胞或悬浮细胞的转染.具体流程如下: 1. 对慢病毒基因进行改造,即敲除U3端的400bp的特定基因,使其逆转录和整合的能力,但保留产生病毒颗粒必须的蛋白的能力. ...

PiggyBAC系统利用PB转座子特有的"剪切粘贴"机制,使DNA片段在载体和基因组之间"自由"转移,从而有效介导外源DNA片段与基因组的整合.目的基因片段克隆 ...

慢病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体.具有感染谱广泛.可以有效感染分裂期和静止期细胞.长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基 ...

慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种,它需要相对较长的孵育时间,所以称之为"慢"病毒,Lenti在拉丁文中就是慢的意思.它包括人免疫缺陷病毒(HIV).猫免疫缺陷病毒( ...

筛选之前需确定G418浓度由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同,一般1 g 的粉剂中有效的G418含量大约为0.722 g.G418是新霉素的类似物,两 ...

慢病毒包装流程: 1.载体质粒与系统质粒共转染293T细胞. 2.收集48~72h的细胞上清液. 3.超速离心纯化浓缩. 4.纯化分装. 5.滴度检测. 慢病毒包装具体实验步骤如下: 一.质粒转染 1 ...

一些实验前的说明 sgRNA验证:在实验开始前,可以通过sgRNA在线验证,筛选高效率的sgRNA用于敲除细胞系的构建. 基因拷贝数:建议在开始实验之前确定目标基因的拷贝数.许多永生化细胞系,尤其是癌 ...

Cas9基因的稳定整合保证了CRISPR Cas9核酸酶的表达. 实验流程: 1. 构建含Cas9 基因的慢病毒载体 2. 转染目的细胞系 3. 筛选稳定且高表达的细胞系 4. 采用基因组PCR以验证 ...

构建载有目的基因的重组转座子载体,复苏目标细胞(以下以293T细胞为例):复苏293T细胞,接种于6孔板中,进行细胞转染:共转染时,重组转座子载体,pSB100,按比例均匀的混合,加入到等体积的转染试 ...

慢病毒构建稳转细胞系实验流程