Nlrp3点突变模型构建技术原理

丙氨酸 352 到缬氨酸 (A352V) 和亮氨酸 353 到脯氨酸 (L353P) 的突变分别与经典 MWS 和 FCAS 患者密切相关，而在重叠综合征患者中则不太相关。通过ES打靶技术生成两个点突变小鼠模型：Nlrp3 A350V 和Nlrp3 L351P。因内含子中Neo的存在，阻断了基因的正常表达，通过交配不同启动子下表达Cre重组酶的小鼠介导Neo在不同部位删除并表达突变基因。

图2. Nlrp3 点突变小鼠打靶策略[3]

Nlrp3 A350V/+ / CreZ（胚胎期删除Neo并表达突变基因）幼崽在出生后 1-2 天或之前表现出炎症表型，在第 4 天出现皮肤脓肿，并出现鳞屑状红斑（图3A）。此外，这些小鼠在第 4 天表现出明显的生长延迟，缺乏色素沉着和毛发生长。Nlrp3 A350V/+ / CreL（骨髓细胞系删除Neo并表达突变基因)幼崽表现出相似的表型，但具有不同的死亡率动力学，因此这些小鼠中有 70% 存活到第 7-9 天，然后以增加的速度死亡。

图3. Nlrp3 点突变小鼠相关表型数据[3]

虽然与 MWS 患者中观察到的荨麻疹样病变不同，但在表达 A350V 的幼崽中观察到的皮肤红斑、脓肿和鳞屑表明存在潜在炎症。突变小鼠总体白细胞计数仅轻度升高，但中性粒细胞和血小板增多是明显的。在 CAPS 患者中一致描述了类似的血液学和皮肤检查结果。来自Nlrp3 A350V/+ / CreL幼崽的发炎皮肤切片进行了 IL-1β 和 IL-6 的免疫组织化学。两种细胞因子（主要在真皮中的 IL-1β 和表皮中的 IL-6）的表达增加，与来自 CAPS 患者的皮肤活检一致，并暗示这些细胞因子在皮肤病理学中的作用。TNFα 没有显着差异，这与先前描述的 CAPS 患者一致。

图4. Nlrp3 点突变小鼠血清和皮肤中多种细胞因子上调[3]