CTLA-4人源化小鼠模型介绍

品系背景：C57BL/6N

品系构建策略：

在小鼠Ctla-4基因位点敲入人源CTLA-4胞外域序列，使其能够表达：a）嵌合型Ctla-4蛋白（人源胞外域+鼠源跨膜域和胞内域）和b）可溶性嵌合体蛋白（人源胞外域+鼠源胞内域）。

品系说明：

• hCTLA-4在小鼠体内具有正常的生理表达和调节模式。

• CTLA-4胞外域人源化，利于hCTLA-4靶向药物的识别。

• 保留小鼠CTLA-4胞内结构域，保证正常的胞内信号转导。

• 小鼠靶基因不表达，避免交叉反应。

• 小鼠的免疫系统功能健全。

研究应用：

本模型可用于评估hCTLA-4靶向药物在免疫健全小鼠体内的有效性及安全性。

模型验证：

• CTLA-4表达检测

图1. hCTLA-4在hCTLA-4小鼠中的表达模式与mCTLA-4在野生型小鼠中的表达模式一致。

hCTLA-4和mCTLA-4在经αCD3抗体活化的hCTLA-4小鼠和野生型小鼠上脾细胞的表达情况：（A）Treg亚群（CD3+CD4+CD25+Foxp3+)，（B）传统CD4+（CD3+CD4+）和（C）CD8+（CD3+CD8+）T细胞。

• 免疫细胞比例检测

图2. hCTLA-4小鼠中各类免疫细胞（T细胞、B细胞、NK细胞、DC细胞、单核细胞）与野生型小鼠的各类免疫细胞的比例接近，小鼠免疫细胞功能正常。

• CTLA-4功能检测

图3. hCTLA-4是有功效的：αhCTLA-4单抗能下调hCTLA-4小鼠体内Treg对Teff的抑制作用。

用CFSE标记CD4+CD25- T细胞（效应T细胞，Teff），并用可溶性αmCD3抗体和APC +/-（CD4+CD25+）Treg以及CTLA-4抗体激活。（A）流式细胞术检测CFSE稀释度；（B）ELISA测定上清液中IL-2的产生情况。

• 体内药效实验

图4. 在hCTLA-4人源化小鼠中，CTLA-4单抗（Ipilimumab）具有抗肿瘤活性。