Cas9介导同源重组构建技术原理 / 开普饭

在许多细菌和古细菌中, CRISPR 形成了独特的遗传基因座,这些基因座特异性靶向病毒核酸,从而获得了针对病毒的免疫力.且随着时间的推移建立起可遗传的编码免疫力.与此同时,病毒也不断在改变逃避策略,来 ...

来自病毒载体的CRISPR-Cas9核酸酶和gRNA的长时表达可能导致脱靶和免疫原性.因此,治疗的基因组编辑应用需要瞬时递送系统.来自日本京都大学的Akitsu Hotta研究组通过利用两种不同的归 ...

导语 2020年10 月 7 日,瑞典皇家科学院宣布,将诺贝尔化学奖授予法国埃马纽埃尔·卡彭蒂耶(Emmanuelle Charpentier)和美国詹妮弗·杜德纳(Jennifer A. Doudn ...

一.利用Cas9 质粒建立knock-out 细胞系实验的详细过程 1.1 确定待敲除基因的靶位点 1.2 设计识别靶位点的识别的一对DNA Oligo(引物) 1.3 构建表达sgRNA的质粒 1. ...

CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) /Cas (CRISPR-associated) 是最近几年出现的 ...

一.试剂 1.细胞培养基及其他细胞培养所需试剂. 2.转染辅助试剂Polybrene(用水配制为6mg/ml,-20℃冻存). 3.Cas9表达慢病毒(制备方法见Cas9慢病毒包装实验). 4.嘌呤霉 ...

原理:阳离子脂质体介导的转染是目前最常用的转染方式之一.阳离子脂质的基本结构由带正电荷的头基和一个或两个烃链组成,带正电荷的头基与带负电荷的核酸通过静电作用形成复合物,经细胞的内吞作用进入细胞.Lif ...

基因文库用途广泛,如用于人类及动植物基因组学研究,基因表达调控研究,分析.分离特定的基因片段等.文库已经越来越多地应用于研究领域,如高通量药物靶点筛选,蛋白质工程定向进化,基因疫苗.抗体改造,生物遗传 ...

cDNA文库,是指含一种生物体所有基因编码的cDNA分子的克隆群.以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cD ...

CRlSPR/Cas9技术是基因编辑历史上的又一里程碑.该技术通过gRNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰.gRNA文库是药物筛选或靶向筛选特定通路的理想工具,gRNA文库的建立将在功能基 ...

分子定向进化模拟自然选择过程,改变原有蛋白的氨基酸序列,以期获得具有功能的突变蛋白.基因突变文库是DNA变体序列的组合,是基因合成.基因突变和定向进化研究相结合的产物.基因突变文库已经越来越多地应用于 ...

完成单位:中国农业科学院作物:河北省农林科学院粮油作物研究所:南京农业大学国家大豆改良中心大豆是典型的对光周期敏感的自花授粉作物.已经进行了许多努力来增加开花的重叠支持农艺渗入和整合的时期来自不同生 ...

通过sgRNA引导Cas9核酸酶切割基因组目的序列导致DNA双链断裂(Double-strand breaks, DSB),同时以包含点突变的同源序列为模版,通过同源重组修复(Homology dir ...

Cas9介导同源重组构建技术原理