流式细胞术是什么？流式细胞术原理及步骤

蛋白质或核酸等生物大分子在某个细胞中或细胞群体中的含量分析对了解该物质的生物学功能是十分重要的。从前人们常用显微分光光度测定技术，目前流式细胞术得到了越来越广泛的应用。

流式细胞术（flow cytometry）可定量地测定某一细胞中的DNA、RNA或某一特异的标记蛋白的含量，以及细胞群体中上述成分含量不同的细胞的数量，它还可将某一特异染色的细胞从数以万计的细胞群体中分离出来，以及将DNA含量不同的中期染色体分离出来，甚至可用于细胞的分选。

流式细胞术技术原理    

细胞群体分散后对待测的某种成分进行特异的荧光染色，然后使悬液中的细胞一个个快速通过流式细胞仪（每秒可达几万个细胞）。当含有单个细胞的液滴通过激光束时，带有不同荧光的细胞所在的液滴被充上正电荷、负电荷，或不被充电，同时检测器可测出并记录每个细胞中的待测成分的含量。因带有不同表面标志的细胞所带的电荷的种类不同，当液滴通过高压偏转板时，带不同电荷的液滴发生偏转，从而达到将细胞分选的目的。如果染色过程不影响细胞活性，那么分离出来的细胞还可以继续培养。

流式细胞仪分选原理示意图

流式细胞术可用于测定哺乳动物细胞的许多参数, 尤其是细胞周期中的变化, 如细胞大小、细胞内某些成分的含量等。用一种可以可逆性通透细胞膜的单克隆抗体, 可直接测定相应的可溶性细胞内蛋白。GFP等荧光蛋白可作为基因表达的报道分子, 流式细胞术可利用它来检测菌株细胞内产物的表达情况。细胞株可以设计成能使GFP 同步表达, 并与目标蛋白的表达量相一致。其荧光含量的测定结果可用于指导产量的控制、细胞株选择、质量控制。