细胞毒性检测实验原理

细胞毒性(cell cytotoxicity)是由细胞或化学物质引起的单纯细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。有时需要进行特定物质细胞毒性的检测,比如药物筛选。

细胞毒性实验技术原理

正常细胞代谢旺盛,其线粒体内的琥珀酸脱氢酶,可将四唑盐类物质(如 MTT、XTT、WST-1和WST-8等 )还原为紫色结晶状物质,沉积在细胞周围,然后通过酶标仪读取OD值,从而检测到细胞增值状态。

Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)是一种基于WST-8(Water Soluble Tetrazolium-8)而广泛应用于细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒,可用于简便而准确的细胞毒性分析。

其基本原理为:WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞毒性分析。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

细胞毒性实验结果示例

参考文献

Liu, Qing-Hua et al. “Reduced expression of annexin A1 promotes gemcitabine and 5-fluorouracil drug resistance of human pancreatic cancer.” Investigational new drugs vol. 38,2 (2020): 350-359. doi:10.1007/s10637-019-00785-5

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