腺病毒纯化工艺开发流程

腺病毒是一种已经被充分表征和广泛研究的病毒载体，能够感染分化和未分化的细胞而不会整合进宿主基因组。此外由于感染后通常只会引起轻度的疾病，腺病毒被认为是一种安全的病毒载体，在基因治疗、溶瘤病毒和病载体毒疫苗中得到广泛应用。

腺病毒是一种相对大的非包膜双链DNA病毒，分子量约为150MDa，颗粒直径大约为95nm^[2]。其外壳的主要组成部分Hexton蛋白在中性条件下带有负电，因此病毒颗粒表面带有大量的负电荷，使得阴离子交换层析成为捕获步骤的首选。然而不同血清型的腺病毒其外壳蛋白不同，相应的下游纯化工艺也需要做精细调整^[3]。

图1 腺病毒颗粒结构^[4]

腺病毒纯化

图2 腺病毒工艺开发流程及设备

腺病毒的纯化步骤通常包括细胞裂解、澄清、核酸酶处理、浓缩换液、捕获层析、精纯层析步骤，Cytiva以最为常用的腺病毒5型进行了纯化工艺的研究，并有多个应用指南可供参考（图3）。

图3 Cytiva腺病毒工艺流程及相关应用指南