载体构建和细胞建系流程 / 开普饭

一.利用Cas9 质粒建立knock-out 细胞系实验的详细过程 1.1 确定待敲除基因的靶位点 1.2 设计识别靶位点的识别的一对DNA Oligo(引物) 1.3 构建表达sgRNA的质粒 1. ...

载体构建流程: 1.确定目的基因并设计引物(含相应酶切位点) 2.PCR扩增 3.连接目的片段于T载体 4.转大肠杆菌.菌落PCR验证 5.提质粒.测序 6.酶切并连接表达载体和测序正确的目的片段 7 ...

RNA干扰技术概述 RNA干扰(RNA interfering,RNAi)现象是由与靶基因序列同源的双链RNA引发的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程. 由于RNAi具有高度的序列专一 ...

③酶的浓度胰蛋白酶一般采用的浓度为0.1%-0.25%(活力1:200或1:250),但遇到难消化的组织时,浓度可适当提高,消化时间适当延长.浓度高对细胞有毒性,而较低浓度的胰蛋白酶在培养液中可促进 ...

载体构建的基本流程: 1.载体质粒的选择: 2.引物设计: 3.PCR扩增: 4.载体和目标片段的限制性酶切: 5.连接转化: 6.挑取克隆提质粒验证. 重要的是,我们要为大家提供了一个载体构建流程模 ...

我们在引物设计那一篇推送中已经介绍过质粒以及质粒载体,我们曾经把质粒载体比喻成一个生产蛋白的机器,把大肠杆菌比喻为生产车间.当我们获得目的片段之后,我们需要组装到机器上面,才能让车间生产目的蛋白.目的 ...

腺病毒是一种非常有效的转基因载体,可插入至37Kb的外源基因,高效的转导效率,可转导不同类型的人组织细胞,不受靶细胞是否为分裂细胞所限制,容易得到高低度,进入细胞内而不整合到宿主细胞基因组,仅瞬间表达 ...

细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移能力的体外试验方法.其原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,即为"划痕& ...

载体构建很困难?图解每一步,手把手教你模拟构建载体. 我们以香蕉枯萎病FPD1基因为例,进行模拟载体的构建. 首先我们将FPD1基因的登录号EU334871.1在NCBI数据库上进行搜索,找到FPD1 ...

腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)是微小病毒科(parvoviridae)家族的成员之一,是一类无法自主复制.无被膜的二十面体微小病毒,其直径约20-26nm,含有4 ...

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